나뭇잎 교과서

식물 조직 배양

당근이나 담배 줄기 한 조각을 영양 배지에 올려 두면 덩어리가 자라고, 호르몬을 바꾸면 줄기나 뿌리가 돋아납니다. 작은 조각에서 식물 한 그루를 다시 키우는 이 기술은 농업과 식물 보존에 어떻게 쓰일까요?

먼저 알면 좋은 것 식물 호르몬(옥신)세포 분화
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식물 조직 배양

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당근 뿌리의 안쪽을 작은 조각으로 잘라 소독한 뒤, 식물 호르몬의 비율이 다른 세 가지 배지에 올렸다. 몇 주 뒤 한 배지의 조각에서는 하얀 뿌리가, 다른 배지에서는 초록 싹이, 나머지 배지에서는 모양 없는 세포 덩어리만 자라났다. 같은 당근의 같은 부분에서 잘라 낸 조각인데 무엇이 이렇게 다른 운명을 정했을까? 그리고 이 방법으로 식물 한 포기에서 몇 포기까지 늘릴 수 있을까?

배지의 호르몬조각에서 자란 것 옥신이 사이토키닌보다 많음뿌리 옥신과 사이토키닌이 비슷함캘러스 (세포 덩어리) 사이토키닌이 옥신보다 많음싹
그림 1. 배지의 옥신과 사이토키닌의 비율이 식물 조각이 뿌리, 싹, 캘러스 가운데 무엇으로 자랄지 정한다.
먼저 알아야 할 것세포의 분화, 식물 호르몬(식물의 자극과 반응), 거듭제곱.

5.2.1다시 무엇이든 될 수 있는 세포

다 자란 식물의 세포도 알맞은 조건만 주면 다시 분열하여 온전한 식물 한 포기를 만들 수 있다. 이 능력을 전형성능이라 한다. 식물 조직 배양은 식물의 작은 조각을 영양소와 호르몬이 든 무균 배지에 키워, 이 능력을 끌어내는 기술이다. 조각은 먼저 분열하여 분화되지 않은 세포 덩어리인 캘러스가 되고, 호르몬의 비율에 따라 뿌리나 싹으로 분화한다. 옥신은 뿌리의 형성을, 사이토키닌은 싹의 형성을 촉진하므로 두 호르몬의 비율이 방향을 정한다.

정리 5.2.1 무균 배양과 증식

배양은 겉을 소독한 조각을 멸균한 배지에 무균 상태로 옮겨 해야 한다. 한 번의 배양 주기마다 싹 하나에서 새 싹이 \(k\)개 생기면, \(n\)번의 주기 뒤에는 \(k^n\)개가 된다.

배지에는 설탕이 들어 있어 세균과 곰팡이도 아주 잘 자란다. 그래서 조각의 겉을 70% 에탄올과 묽은 차아염소산 나트륨으로 소독하고 멸균한 물로 헹군 뒤, 무균 작업대 안에서 불에 달군 핀셋으로 옮긴다. 소독이 지나치면 조각이 죽고, 모자라면 오염된다. 그래서 오염률과 생존율을 함께 기록하며 소독 시간을 맞춘다.1

5.2.2한 포기에서 수천 포기로

싹이 자라면 잘라서 새 배지로 옮기고, 그 싹에서 다시 여러 개의 싹이 돋게 한다. 이 과정을 몇 주마다 되풀이하면 싹의 수가 거듭제곱으로 늘어난다. 이렇게 얻은 식물은 모두 처음 식물과 유전적으로 같은 복제 식물이다. 씨로 키우면 형질이 섞이는 품종이나, 바이러스에 걸리지 않은 깨끗한 모종이 필요한 감자와 딸기 같은 작물에 이 방법을 쓴다. 다만 유전적으로 모두 같아서, 한 병에 약한 품종이면 한꺼번에 피해를 입을 수 있다.

항목값 조각 40개 가운데 오염6개 (15%) 오염 안 된 34개 가운데 캘러스 형성27개 (79%) 4주마다 싹 1개 → 4개, 6번 되풀이4⁶ = 4096개
그림 2. 오염률과 형성률을 기록하고, 싹이 4주마다 네 배가 되면 반년 만에 4000개가 넘는다.

5.2.3예제 풀이

예제 5.2.2

그림 2에서 오염률과, 오염되지 않은 조각의 캘러스 형성률을 구하여라. 4주마다 싹 하나에서 새 싹 4개를 얻는다면 24주 뒤에는 싹이 몇 개인가? 매 주기마다 싹의 10%가 오염으로 버려진다면 몇 개가 되는가?

오염률은 \(6/40 = 15\)%, 캘러스 형성률은 \(27/34 \approx 79\)%이다. 24주는 4주 주기가 6번이므로 싹은 \(4^6 = 4096\)개가 된다.

매 주기마다 10%를 잃으면 한 주기의 실제 증가는 \(4 \times 0.9 = 3.6\)배이고, 6번 뒤에는 \(3.6^6 \approx 2177\)개이다. 손실 10%가 거듭 곱해져 절반 가까이로 줄었다. 그래서 대량 증식에서는 무균 기술이 수득에 큰 영향을 준다. 즉 식물 조직 배양은 전형성능을 가진 세포를 호르몬의 비율로 원하는 기관으로 분화시키고, 무균 상태에서 거듭 나누어 같은 식물을 거듭제곱으로 늘리는 기술이다.

아래 탐구 카드에서 식물 조각을 호르몬 비율이 다른 배지에 배양하여 뿌리, 싹, 캘러스의 형성을 비교해 보자.

  1. 1958년 미국의 스튜어드는 당근 뿌리의 체관부 세포 하나하나를 배양하여 온전한 당근을 키워 냈다. 다 자란 식물 세포에도 몸 전체를 만드는 유전 정보가 그대로 남아 있다는 것을 보인 실험이었다.
마무리

식물 세포는 전형성능이 있어 작은 조각도 무균 배지에서 캘러스가 되었다가, 옥신과 사이토키닌의 비율에 따라 뿌리나 싹으로 분화한다. 싹을 거듭 나누어 옮기면 같은 식물이 \(k^n\)으로 늘어나지만, 오염 손실도 거듭 곱해지므로 무균 기술이 중요하다. 처음 질문의 당근 조각이 서로 다르게 자란 것은 배지의 옥신과 사이토키닌의 비율이 달랐기 때문이다.

탐구 1

잎이나 줄기 한 조각에서 식물 한 그루를 다시 키울 수 있을까?

실험 · 식물 조직 배양 · 옥신과 사이토키닌의 비율
절편

스쿠그와 밀러(1957)의 담배 줄기 속 실험의 경향을 따른 모식 모형이다. 반응하는 농도와 비율은 식물 종류, 조직, 호르몬 종류에 따라 다르다. 지도의 막대는 기록한 조합마다 절편 10개 가운데 캘러스(갈색)·줄기(초록)·뿌리(파랑)가 생긴 비율이고, 붉은 × 는 오염된 절편이 있었다는 뜻이다.

  1. 탐구 문제잘라 낸 식물 조각을 영양 배지에 올려 두면 무엇이 자랄까? 같은 조각에서 줄기가 날지, 뿌리가 날지, 덩어리만 커질지는 무엇이 정할까?
  2. 복원식물 세포는 다 자란 뒤에도 조건만 맞으면 다시 분열하고 분화해 완전한 개체가 될 수 있다(전형성능). 분화를 멈추고 계속 분열하는 세포 덩어리를 캘러스라 한다. 옥신은 세포 신장과 뿌리 형성, 사이토키닌은 세포 분열과 눈(줄기) 형성을 촉진한다.
  3. 설계배지는 무기 염류·비타민·설탕 3%·한천 0.8%를 넣은 MS 배지이다. 조작 변인은 옥신과 사이토키닌의 농도, 종속 변인은 4주 뒤 캘러스·줄기·뿌리가 생긴 절편 수이다. 온도(25 °C), 빛(16시간), 절편 크기는 통제한다. 무균 과정은 70% 에탄올 30초 → 1% 차아염소산 나트륨 10~15분 → 멸균수로 3번 헹구기, 배지 121 °C 15~20분 고압 멸균, 클린 벤치 안에서 화염·알코올로 소독한 기구 쓰기이다.
  4. 분석사이토키닌/옥신 비율이 높으면 줄기, 낮으면 뿌리, 비슷하면 캘러스만 자란다. 두 호르몬이 모두 거의 없으면 담배 절편은 잘 자라지 않는다. 즉 기관이 생기는 방향을 정하는 것은 한 호르몬의 양이 아니라 두 호르몬의 비율이다.
  5. 측정옥신을 1 mg/L로 두고 사이토키닌을 0부터 3 mg/L까지 바꾸며 배양하고, 다음에는 반대로 해 보자. 지도에서 줄기와 뿌리가 갈리는 경계는 대각선(비율 일정) 방향인가? 그다음 무균 과정을 하나씩 빼 보자.
  6. 오차·안전설탕이 든 배지는 곰팡이와 세균도 잘 키우므로, 무균 과정이 하나만 빠져도 며칠 안에 배지가 오염된다. 반대로 차아염소산 나트륨에 너무 오래 담그면 절편 자체가 상해 갈변한다. 차아염소산 나트륨은 피부와 눈을 상하게 하므로 장갑과 보안경을 쓰고, 알코올 램프 가까이에 에탄올 병을 두지 않는다. 이 카드의 반응 경계는 모식이므로, 실제로는 농도 조합을 촘촘히 바꿔 가며 직접 찾아야 한다.

확인조건이 달라지면

바이러스에 감염된 딸기 품종을 건강한 묘목으로 대량 번식하려 한다. 어느 방법이 알맞을까?

읽기 2

식물 조직 배양은 농업과 보존에 어떻게 쓰일까?

읽기 · 식물 조직 배양의 활용 분야

조직 배양으로 얻은 개체는 어미와 유전자가 같은 클론이고, 작은 시험관 안에서 많이, 깨끗하게 키울 수 있다. 이 세 가지 성질이 어디에 쓰일까?

분야무엇을 하나예
무병묘 생산바이러스가 거의 없는 줄기 끝 생장점을 잘라 배양해 바이러스 없는 묘목을 얻음감자 씨감자, 딸기, 마늘, 카네이션
대량 번식한 개체에서 짧은 기간에 같은 형질의 묘목을 수만 그루 얻음난초류, 바나나, 블루베리 묘목
멸종 위기 식물 보존씨가 잘 맺히지 않거나 개체가 적은 식물을 시험관이나 액체 질소(−196 °C) 속에서 보관하고 다시 키움희귀 자생 식물, 작물의 유전 자원 보관
유용 물질 생산세포나 뿌리를 탱크에서 배양해 약효 성분을 얻음주목 세포 배양으로 얻는 항암제 파클리탁셀, 산삼 부정근 배양
품종 개량유전자를 넣은 세포 하나에서 식물 전체를 재분화시키거나, 꽃밥 배양으로 반수체를 얻어 순계를 빨리 만듦형질 전환 작물, 꽃밥 배양으로 육성한 벼 품종

조사 과제

우리 지역의 농업기술센터나 종묘 회사가 조직 배양으로 생산하는 작물을 찾아보고, 어떤 이점 때문에 배양하는지 정리해 보자.

조직 배양 묘목은 모두 유전자가 같다. 같은 병이 돌면 어떤 일이 생길 수 있을지, 바나나의 사례를 찾아 토론해 보자.

판단조직 배양 묘목도 오래 계대하면 염색체 이상 같은 변이(체세포 변이)가 생길 수 있어, ‘어미와 완전히 같다’는 말은 조건이 붙는다. 또 생장점 배양으로 얻은 묘목도 바이러스 검사로 확인한 뒤에야 무병묘라고 부를 수 있다.

확인조건이 달라지면

씨앗을 거의 맺지 않는 희귀 식물을 보존하려 한다. 조직 배양이 특히 유리한 까닭은?

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